如何确保可靠的吸光度结果

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基于试管的吸光度测量仅与用于测量的系统一样好。由于环境条件的变化，基线漂移和其他光谱变化可以通过经常进行背景和参考测量来解决。用匹配的试管克服了试管与试管之间的差异。测量采集参数设置为提供尽可能高的信噪比。那么，为什么当你切换样本时，你的基线会降到零以下呢?为什么吸光度值是负的?为什么标准曲线相关性这么差?答案可能存在于你的系统的一个组件中，你可能甚至没有想到——你的试管支架。

准确的吸光度数据需要一个精心设计的试管支架，使用户能够重复地移除和更换试管(图1)。

图1:即使遵循最佳实践，不理想的设备也会影响实验结果。方形比色管支架的设计是为了减少由于比色管安装不当而导致的吸光度测量误差。

即使是最昂贵的，匹配的石英比色皿也不会提供精确的数据，如果比色皿不始终放入比色皿支架中。比色皿应在保持器中紧密贴合，因此可以拆下并替换，而不会导致光谱数据的变化。向下移动的基线和否定的吸光度值是立即警告问题的迹象。这些问题将数据称为问题并侵蚀结果。您如何信任这些事件发生时刚刚收集的任何数据？

具有方形一个比色皿支架的可重复性

您努力创建样本并设计您的实验。不要浪费所有有价值的时间和努力在比色皿持有人身上破坏你的一致，可重复测量的能力。即使是最精确的样品甚至最精确的样品也仅作为用于测量它们的系统的准确性。不要让比色皿持有人破坏你的工作。使用方形的试管支架因为伟大的数据来自可靠的设备和周到的使用。

有时，比色皿持有人根本不会“觉得”对。你有没有把你的比色皿放入比色皿架上并质疑你的比色杯的摇摆不全？Cuvette是否安全地保持频谱数据是多么可重复的？您的标准曲线是否像图2中的曲线一样不准确？

图2:浓度和吸光度值之间相关性较差的标准曲线示例。吸光度的差异是由于蛋白质浓度，样品制备的错误，还是试管在支架中可重复放置的问题?

有了Square One，比色管就可以紧紧地固定在合适的位置，而不会损坏精密的比色管光学表面。将试管插入试管支架，为用户提供触觉反馈，以确保试管是安全的。

Square One提供了两者的可重复数据石英(图3)塑料试管（图4）。为了测试这一点，我们通过去除和更换比色皿支架中的杯皿10次来实现吸光度。如图所示，由此产生的光谱覆盖，无论是否使用石英或塑料比色皿。

图3:当一个含有稀释的绿色食用染料的石英比色皿被移除并在比色皿支架中更换10次时，Square One光谱重复性的例子。光谱覆盖几乎完美，410 nm处的平均吸光度为0.47 AU，标准偏差仅为0.0007 AU。

图4：当除去含有稍微浓缩的绿色食品染料的一次性比色皿中的一次性杯皿被除去并在比色皿夹持器中替换10次时，具有正方形的谱重复性的示例。即使用一次性比色皿，光谱几乎完美地覆盖，平均吸光度为0.47Au，410nm，标准偏差仅为0.0008 Au。

关于方形一个比色皿架

方形1试管支架可接受1厘米径长的试管。每个支架包括三个具有光纤耦合的准直透镜，一个集成镜，以提高荧光测量的灵敏度，一个完全集成的盖，以阻挡环境光，和两个滤光片支架，接受12.5和25毫米直径的滤光片。当与Ocean Insight亚博最新网站多少光谱仪和光源一起使用时，Square One是吸收、透射、荧光、散射或这些光学现象的任何组合的理想选择。

额外的吸光度测量提示

有了优化的设备，包括Square One试管支架，您可以将注意力转向与准确的吸光度测量相关的其他标准。以下是一些建议:

• 吸光度可能因比色皿而异。如果比色皿在所有方向上具有相同的路径长度，则它也会随着样品架中的比色皿的方向而变化。最准确，始终使用相同的比色皿。如果这是不可行的，每次放置在比色皿支架中时，都会以相同的方式定向比色皿。
• 为推荐的时间（在某些情况下最多30分钟）热身的光源。光源输出将继续略微变化，直到源处于热平衡，影响测量值。
• 在软件中记录频繁的黑暗和参考测量以重新建立准确的基线。
• 切勿关闭光源或断开纤维以进行黑暗测量。相反，阻挡其原点的光源，或在比色皿支架中的过滤器槽处块。确保使用的对象将阻止100％的光;金属运作良好。
• 设置光谱仪的积分时间，使参考光谱峰值在全量程计数的80% ~ 90%。这让您可以利用光谱仪的全动态范围，提高信噪比性能。
• 将频谱平均值设得尽可能高，以改善信噪比(S:N)。S:N随着取的平均值的平方根而提高。例如，将average设置为9可以使S:N提高3倍。
• 增加BoxCar值以进一步平滑频谱中的噪声。这是波长的移动平均值，因此盒子值为2将平均每侧的另外2个像素（总共5个），并将该平均值分配给中心像素。如果BoxCar值设置得太高，它将开始模糊频谱形状，因此请仔细使用此功能。为了平滑数据而不影响分辨率，将Boxcar值设置为等于光谱仪的像素分辨率。